Шифф йодная кислота

Шифф йодная кислота

Метод Шифф — йодная кислота применяется для выявления гликогена и нейтральных МПС. Наиболее распространена модификация Хочкисса и МакМануса.

Фиксация и способы приготовления срезов различны. Срезы из дистиллированной воды переносят на 15 мин в раствор нерйодата натрия или калия (350 мг перйодата калия или натрия + 50 мл дистиллированной воды + 0,5 мл 35% азотной кислоты), затем быстро ополаскивают в двух порциях дистиллированной воды и помещают на 5 мин в раствор сернистой воды (1,5 г метабисульфита натрия + 300 мл дистиллированной воды + 15 мл 1 и раствора соляной кислоты). После этого переносят в реактив Шиффа на 30 — 60 мин и снова в сернистую воду (три порции по 5 мин в каждой).

Затем выдерживают в дистиллированной воде до покраснения срезов, докрашивают ядра гематоксилином Эрлиха, разведенным до цвета мадеры, в течение 5 мин н промывают в водопроводной воде до посинения срезов.

Ополаскивают дистиллированной водой, проводят через спирты восходящей концентрации (70, 96, 100%), просветляют в ксилоле в течение 10 — 12 ч, заключают в канадский бальзам. Для идентификации гликогена и нейтральных МПС контрольные срезы перед окраской обрабатывают амилазой слюны или диастазой, затем красят, как указано выше.

Приготовление раствора Шиффа

1 г основного фуксина, растертого в ступке, помещают в 200 мл кипящей дистиллированной воды, встряхивают в течение 5 мин, охлаждают до 50 °С, фильтруют, добавляют вначале 20 мл 1 н. раствора хлористоводородной (соляной) кислоты, охлаждают до 25 °С, затем 1 г метабисульфата натрия или калия.

Оставляют в темноте на 14 — 24 ч, затем добавляют 2 г активированного угля, встряхивают в течение 1 мин, снова фильтруют и ставят в холодильник. Раствор должен быть бесцветным. Сернистую воду и перйодат калия или натрия рекомендуется готовить непосредственно перед употреблением.

«Патоморфологическая диагностика заболеваний кожи»,
Г.М.Цветкова, В.К.Мордовцев

Читайте далее:

Биопсию кожи лучше производить циркулярным полном, который значительно упрощает взятие материала и не травмирует прилежащие участки. Для постановки патологоанатомического диагноза большое значение имеют правильная фиксация и последующая обработка биопсированного кусочка кожи. Лучшим фиксатором для обычных гистологических целей является 10% нейтральный формалин. Его количество должно превышать в 50 раз объем биоптата. Так, биоптат размером 1 X…

Гистохимические методы исследования в основном применяются для научных целей, однако некоторые из них имеют диагностическое значение, как, на пример, ШИК-реакция, окраска альциановым голубым или толуидиновым синим, азаном по методу Гейденгайна и др. С помощью ШИК-реакции выявляют полисахариды: гликоген и муконолисахариды (МПС), особенно нейтральные. Эта реакция необходима для определения ШИК-положительных фибриноида и фибрина. Грибы и хитиновые…

Срезы, полученные из материала, фиксированного разными способами, помещают в 12% нейтральный формалин на 1 сут, после чего ополаскивают их дистиллированной водой и оставляют в ней на 10 — 15 мин. Затем срезы переносят в раствор перманганата калия (100 мг перманганата калия + 40 мг дистиллированной воды) на 10 мни, хорошо отмывают в нескольких порциях дистиллированной…

В 40 мл дистиллированной воды растворяют 80 мг нитрата серебра. К 10 мл раствора прибавляют 8 капель 40% гидроокиси натрия до получения осадка. Затем по каплям продолжают добавлять аммиак до растворения осадка, после чего до 40 доливают дистиллированную воду. Раствор должен быть бесцветным. Окраска азокармином по методу Гейденгайна выявляет белки соединительной ткани и плазмы крови….

Читайте также:  Коричневые выделения после первого секса

0,25% водный раствор азокармина кипятят несколько раз, охлаждают и к 100 мл красителя прибавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты. Анилиновый спирт получают путем добавления к 50 мл 96% спирта 3 капель анилинового масла. Большое диагностическое значение имеют также исследования с помощью поляризационного микроскопа для выявления двоякопреломляющих липидов инородных тел и амилоида. Двоякопреломляющие липиды характерны для…

Реакция Фельгена с реактивом Шиффа на ДНК

Реакция Фельгена указывает на присутствие ДНК, поэтому она прежде всего может быть использована для констатации наличия или отсутствия ядер в клетках, их размеров, формы, местоположения и т. д. Кроме того, интенсивность окрашивания может дать косвенные указания на количественные изменения ДНК.

Реактив Шиффа — фуксинсернистая кислота — является характерным реактивом на альдегиды. На свойстве реактива Шиффа взаимодействовать с альдегидными группами основана и реакция Фельгена с этим реактивом на ДНК. Однако, ввиду того что в молекуле ДНК альдегидные группы связаны, их надо предварительно освободить. Это достигается проведением гидролиза ДНК слабой кислотой, в результате которого происходит отщеплейие пуриновых оснований (аденина, гуанина) от молекулы ДНК и образуется остаток молекулы ДНК со свободными альдегидными группами:

Изменения возникают у первого углеродного атома дезоксирибозы; в месте отрыва пуриновых оснований выявляется потенциальная альдегидная группа. При. этом фуранозная форма дезоксирибозы превращается в форму нециклического сахара. В процессе реакции к двум альдегидным группам дезоксирибозы присоединяется одна молекула фуксинсернистой кислоты.

Фуксинсернистая кислота (лейкофуксин) получается из кислого раствора основного фуксина (парафуксина) в 1 н. соляной кислоте при насыщении его сернистым ангидридом. Сернистый ангидрид образуется при взаимодействии соляной кислоты с бисульфитом натрия, которые вносятся в кислый раствор основного фуксина:

При пропускании сернистого газа в раствор фуксина нарушаются две двойные связи, в одном из трех ароматических колец фуксина исчезает хиноидная группировка, а вместе с ней и лилово-красная окраска, свойственная фуксину. Фуксинсернистая кислота — непрочное бесцветное соединение.

Получение фуксинсернистой кислоты из основного фуксина протекает следующим образом: фуксин, взаимодействуя с соляной кислотой, образует комплексное соединение, которое далее реагирует с сернистой кислотой по следующей схеме:

Таким образом, при образовании фуксинсернистой кислоты к фуксину присоединяются две группы (-SO2H).

При реакции с альдегидами хиноидная группировка восстанавливается, так как фуксинсернистая кислота — неустойчивое соединение, разлагается с образованием сернистой кислоты.

При взаимодействии одной молекулы фуксинсернистой кислоты с двумя молекулами остатков ДНК, имеющих обнаженные альдегидные группы, получается одна молекула окрашенного соединения.

При подготовке материала для проведения реакции Фельгена обычно рекомендуют фиксацию в спиртовых и кислых фиксаторах. Чаще всего применяют фиксатор Карнуа (стр. 45). Такой фиксатор осаждает нуклеопротеиды, что приводит к удачным морфологическим картинам. Однако длительное пребывание материала в фиксаторе вызывает разрушение связи между нуклеиновыми кислотами и белками, приводит к постепенной экстракции нуклеиновых кислот и дает искаженную картину. Поэтому пребывание в фиксаторе надо максимально ограничивать.

Читайте также:  Хлорофиллипт раствор в масле инструкция

1) Реактив Шиффа (фуксинсернистая кислота).

Приготовление реактива Шиффа. 1 г основного фуксина растереть в ступке и растворить в 200 мл кипящей дистиллированной воды; охладить до 50°С. В охлажденный раствор добавить 20 мл 1 н. соляной кислоты * и охладить до 25°С. Добавить 1 г бисульфита или метабисульфита натрия. Полученную смесь взболтать с активированным углем (от 1 да 3 мин) и профильтровать. Налить в темный или завернутый в темную бумагу сосуд, закрыть его притертой пробкой и поместить в темноту на 12 или более часов до обесцвечивания основного фуксина и образования фуксинсернистой кислоты.

* ( 1 н. соляная кислота соответствует 10%-ному раствору, приготовленному из концентрированной соляной кислоты (уд. в. 1,19))

2) Сернистая вода.

Приготовление сернистой воды. К 200 мл дистиллированной воды добавить 20 мл 1 н. соляной кислоты и 1 г бисульфита натрия.

3) 1 н. соляная кислота.

4) Среды для обезвоживания объектов и заключения их в канадский бальзам (стр. 66-70).

5) Канадский бальзам.

Проведение реакции

* ( См. сноску на стр. 118.)

1. Погрузить препараты в 1 н. соляную кислоту на несколько секунд.

2. Перенести их в заранее нагретую до 60° С 1 н. HCl и поместить в термостат при температуре 60° С (или на водяную баню с такой же температурой) на 5-10 мин * .

* ( Длительность гидролиза зависит от примененного фиксатора. При употреблении фиксатора Карнуа и формалина оптимальное время 8 мин.)

3. Сполоснуть препараты холодной 1 н. HCl.

4. Поместить их в реактив Шиффа на 1 ч.

5. Отмыть избыток реактива Шиффа сернистой водой (3 смены по 3-5 мин).

6. Промывать препараты в водопроводной воде в течение 5-10 мин, сменяя начинающую розоветь воду.

7. Довести препараты до бальзама через 96%-ный, 100%-ный спирт, смесь спирта с ксилолом и ксилол.

8. Наблюдать появление малиновой окраски.

Результаты реакции (табл. 20)


Таблица 20. Реакция Фельгена. Кончик корешка лука. А — общий вид кончика корешка лука в разрезе; Б — детали строения кончика порошка лука; 1 — корневой чехлик; 2 — зона деления; 3 — зона растяжения (увеличение 7 X 8 и 7 X 40)

В кончике корешка лука ядра приобретают малиново-фиолетовую окраску. Ядра зоны растяжения и особенно всасывания выглядят несколько менее яркими, чем ядра зоны деления. Ядрышки, цитоплазма и оболочки клеток остаются неокрашенными.

В зерновке кукурузы ядра корешка, почечки и всех остальных тканей зародыша, а также клеток алейронового слоя окрашиваются в характерный для реакции Фельгена цвет. Сплюснутые и растянутые ядра клеток эндосперма окрашиваются более бледно.

Станьте одним из тех удачников, которые получат добротное прислуживание от самых изящных индивидуалок. Всегда соблазнительные шлюхи с вашего двора ежедневно удовлетворяют молодых людей разными способами .

Периодная кислота – Шифф ( PAS ) — это метод окрашивания, используемый для обнаружения в тканях полисахаридов, таких как гликоген , и слизистых веществ, таких как гликопротеины , гликолипиды и муцины. Реакция периодической кислоты окисляет вицинальные диолы в этих сахарах , обычно разрывая связь между двумя соседними атомами углерода, не участвующими в гликозидной связи или замыкании кольца в кольце моносахаридных единиц, которые являются частью длинных полисахаридов, и создавая пару из альдегидов на два свободных концах каждого сломанного моносахаридакольцо. Условия окисления должны в достаточной мере регулироваться, чтобы не окислять альдегиды в дальнейшем. Эти альдегиды затем реагируют с реактивом Шиффа, давая пурпурно-пурпурный цвет. Подходящее базовое пятно часто используется как контрастное пятно .

Читайте также:  Кукурузные рыльца в пакетиках

• Окраска диастазы PAS (PAS-D) — это окраска PAS, используемая в сочетании с диастазой , ферментом , расщепляющим гликоген.

• Альциановый синий / периодическая кислота — Шифф (AB / PAS или AB-PAS) использует альциановый синий перед шагом PAS.

Содержание

  • 1 Использует
  • 2 Смотрите также
  • 3 Ссылки
  • 4 внешние ссылки

Использует

Окрашивание PAS в основном используется для окрашивания структур, содержащих высокую долю макромолекул углеводов ( гликоген , гликопротеин , протеогликаны ), обычно обнаруживаемых, например, в соединительных тканях , слизи , гликокаликсе и базальных пластинках .

Окрашивание PAS может использоваться для диагностики нескольких заболеваний:

  • Болезнь накопления гликогена (по сравнению с другими нарушениями накопления).
  • Аденокарциномы , которые часто выделяют нейтральные муцины.
  • Болезнь Педжета груди .
  • Саркома альвеолярной мягкой части .
  • Окрашивание макрофагов при болезни Уиппла .
  • Его можно использовать для диагностики дефицита α1-антитрипсина при положительном окрашивании перипортальных гепатоцитов печени.
  • Агрегаты PAS-положительных лимфоцитов присутствуют в эпидермисе при грибковом микозе и синдроме Сезари , которые называются микроабсцессами Путрие.
  • Саркома Юинга
  • Эритролейкоз , лейкоз незрелых эритроцитов. Эти клетки окрашивают в яркий фуксию.
  • Легочный альвеолярный протеиноз .
  • Грибковаяинфекция , клеточные стенки грибов окрашиваются в пурпурный цвет; это работает только с живыми грибами. В отличие от этого, окрашивание метенамином серебра (GMS) Grocott окрашивает как живые, так и мертвые грибковые организмы.
  • Он используется для определения гликогена в образцах биопсии легких у младенцев с легочным интерстициальным гликогенозом (PIG).
  • Его можно использовать для выделения суперсшитых липидных включений при цероидном липофусцинозе (NCL).

Присутствие гликогена можно подтвердить на срезе ткани, используя диастазу для переваривания гликогена из среза, а затем сравнивая срез PAS, расщепленный диастазой, с нормальным срезом PAS. Слайд с отрицательной диастазой покажет пурпурное окрашивание там, где гликоген присутствует в срезе ткани. На предметном стекле, обработанном диастазой, не будет положительного окрашивания PAS в тех местах на предметном стекле.

Окрашивание PAS также используется для окрашивания целлюлозы . Одним из примеров может быть поиск имплантированных медицинских устройств, состоящих из неокисленной целлюлозы.

Если окрашивание PAS будет производиться на ткани, рекомендуемым фиксатором будет 10% формалин с нейтральным буфером или раствор Буэна . Для мазков крови рекомендуемый фиксатор — метанол . Глутаральдегид не рекомендуется, поскольку свободные альдегидные группы могут вступать в реакцию с реагентом Шиффа , что может привести к ложноположительному окрашиванию.

Ссылка на основную публикацию
Шизоидное расстройство личности как лечить
Одно из наиболее распространенных психических заболеваний, которое встречается у значительного количества людей – это шизоидное расстройство личности. Это заболевание характеризуется...
Швы после артроскопии коленного сустава
По статистике, каждый год в мире делают порядка 4 миллионов операций на колене. В их числе – вмешательство, относящееся к...
Шевеление в левой стороне живота
что-то шевелится в животе,но не беременность, уже 9 месяцев нет месяч-ых, иногда влагалище надувается, от этого боли и раздувает от...
Шизофреник женщина
Шизофрения у женщин - это тяжелое психическое заболевание, главным признаком которого выступает изменение личности по типу шизофренического дефекта с полиморфной...
Adblock detector